4、高效果腺體外抗氧化活性試驗
（1）對DPPH的液相氧化清除能力
①DPPH溶液的配製自由基
精密稱取19.716mgDPPH，用無水乙醇溶解定容於250mL容量瓶中，色谱素得C=0.2mmol／L的法测溶液，於40℃冰箱避光保存。定黑
②樣品溶液的肋花製備
分別稱取幹燥的黑果腺肋花楸提取物幹浸膏、矢車菊素、楸提取物氯化矢車菊素、中氯VC適量，化矢含量溶解並且配製成不同質量濃度的车菊樣品溶液。分別取不同質量濃度的及抗究樣品溶液2mL於10mL比色管中，按參考文獻所述方法進行操作，性研在517am處測定吸光度A空白，高效果腺A樣品，液相氧化A對照。色谱素按照公式計算黑果腺肋花楸提取物、矢車菊素、氯化矢車菊素、VC對DPPH自由基的清除率。
DPPH自由基清除率／％=(A空白一A樣品+A對照)／A空白×100
式中，A空白-蒸餾水代替供試品溶液與DPPH溶液反應後的吸光度值；A樣品-各供試品溶液與DPPH溶液反應後的吸光度值；A對照-各供試品溶液與無水乙醇反應後的吸光度值。
（2）FRAP法測定總的抗氧化能力
①FRAP工作液的配製
分別配製0.2mol／L醋酸鈉緩衝液(pH=3.6)，10mmol／LTPl億溶液(溶於40mmol／L鹽酸)，20mmol／LFeCl3溶液。將上述三者按體積比10:1:1混合。
②FeSO4標準曲線的製備
精確稱取0.01419FeSO4，溶解並定容至50mL容量瓶中，即得濃度為lmmol／LFeSO4溶液。吸取該溶液適量，配製成質量濃度為2.82、8.46、14.10、19.74、25.38、28.20、33.84μg／mL的溶液。取各溶液加入3mLFRAP工作液，混勻後於37℃反應10min，於593nm處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，製定還原力標準曲線，列出擬合方程。
③被測物總抗氧化活性測定
分別稱取幹燥的黑果腺肋花楸提取物幹浸膏、矢車菊素、氯化矢車菊素、VC適量，溶解並且配製成不同質量濃度的樣品溶液。分別取不同質量濃度的樣品溶液3mL於10mL比色管中，按參考文獻所述方法進行操作，在593nm處測定吸光度值。
(3)鉬酸銨法測定總的抗氧化能力
①鉬酸銨反應體係的配製分別稱取
2.13g磷酸鈉、0.99g鉬酸銨、6.67mL硫酸溶於200mL水中，混勻。
②VC標準曲線的製備
精確稱取0.02599VC，用蒸餾水溶解並定容至50mL容量瓶中，即得濃度為0.5mg／mL維生素C溶液。吸取該溶液適量，配製成質量濃度為25、50、75、100、200、250tg／mL的溶液。吸取O.5mL不同濃度的溶液，加入到5mL鉬酸銨反應體係中，反應試管於95℃水浴90min。反應液充分冷卻至室溫後，於695am處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，製定VC抗氧化能力標準曲線，列出擬合方程。
③被測物總抗氧化活性測定分別稱取幹
燥的黑果腺肋花楸提取物幹浸膏、矢車菊素、氯化矢車菊素適量，溶解並且配製成不同質量濃度的樣品溶液。分別取不同質量濃度的樣品溶液0.5mL加入到5mL鉬酸銨反應體係中，按參考文獻所述方法進行操作，在695nm處測定吸光度值。被測物的總抗氧化能力以相當於多少濃度的VC來表示。
二、結果與分析
（1）色譜條件的選擇
色譜柱為大連依利特ODS2C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：A為甲醇，B為0.2％磷酸水溶液(W)，程序為0～30min，40％A；流速：0.8mL／min；柱溫：30℃；進樣量：20μL；檢測波長為276nm。氯化矢車菊素的保留時間為24.21min，理論塔板數為21917，與相鄰峰的分離度為2.28。HPLC色譜圖見圖1。
2、流動相條件的選擇
試驗結果表明適宜的流動相為甲醇-O.2％磷酸水溶液(V:V=40:60)，能夠將黑果腺肋花楸提取物中的氯化矢車菊素與其他物質分開，保留時間適中，按照氯化矢車菊素峰值計算理論塔板數為21917，與相鄰峰的分離度為2.28，故選擇在上述流動相條件下進行相關試驗。
3、供試品溶液製備方法的優化試驗結果
（1）正交試驗結果
稱取黑果腺肋花楸提取物9份，每份0.5g，放入圓底燒瓶中，按正交試驗表進行試驗，結果見表2。
正交試驗結果表明：供試品溶液製備方法的最優方案為A3B3C2，各因素的影響大小為：水解時間＞水解溫度＞溶劑酸濃度，確定供試品溶液製備方法的最優方案為：水解溫度為100℃、水解時間為120min、酸濃度為3％鹽酸甲醇水溶液。
（2）工藝穩定性驗證試驗
三次試驗結果氯化矢車菊素的峰麵積分別為1379.85、1382.57、1380.43，平均值為1380.95，其氯化矢車菊素含量分別為1.8660、1.8527、1.8523mg／g，平均值為1.8570mg／g，RSD為0.78％，結果表明，優選的供試品溶液製備方法工藝比較穩定。
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